乳膠微球常見問題
乳膠微球又稱聚苯乙烯微球、PS微球等。具有不同結構形態和分子量的單分散聚合物微球，由于在其表面引入不同官能團使其具有比表面大，吸附性強，力學性能好，方便回收利用等優點而在很多領域有廣闊的應用前景，其中聚苯乙烯微球(PS)是一種常見的高分子微球材料，隨即聚合物微球的制備與研究成為了高分子科學研究的新領域。聚苯乙烯微球具有高分子微球材料的通性，如粒徑小、比表面積大、吸附性強、分散性好、易于改性和修飾等。廣泛應用于生物化學、電化學檢測、催化劑、吸附劑、色譜填料、涂料等領域。?
乳膠微球常見問題
1.如何選擇乳膠微球得粒徑？
一般選擇粒徑小的乳膠微球，則需抗體量多，精密度與線性相對較好：而選擇粒徑大的乳膠微球，則所需抗體少，精密度與線性相對較差，相對于小粒徑，大粒徑靈敏度較好。
2.一般情況下微球濃度大概是多少？
整個測定體系中，微球濃度大約在0.01%左右，更多的是與試劑本身規定的線性有關系。
3.蛋白(抗體)與微球偶聯前，微球活化時間越長，效率越好？
需根據實驗情況具體分析。如酸基微球活化所需時間很短，一般以10-20 min為宜，長時間活化反而會降低偶聯效率。
4.在使用離心方法偶聯乳膠微球，一般需多大得離心力？
離心力與所使用乳膠微球粒徑有關，一般粒徑為70nm左右微球大概需13000g/min離心30 min以上，粒徑越小所需時間越長，離心力越大。
5.蛋白無法吸附到微球上？
可通過多種方法改進。如加入更多的蛋白：去除微球表面活性劑，釋放其蛋白結合位點：引入中間物，將微球與蛋白相連；改變緩沖液等。
6.標記時加入了大量蛋白，但是仍然無活性？
可嘗試改變蛋白加入量，從而改變蛋白與微球結合的空間構象；使用表位稀釋物，占據微球上的部分蛋白結合位點，防止蛋白靠的太近。
7.乳膠微球與抗體偶聯后，當時沒有發現凝集，但隔夜后發現有凝集，這就是什么原因？如何控制與避免？
這種情況一般是偶聯效率低造成。當體系中蛋白不足或其它原因，使微球表面在交聯后還空出許多反應基團時，這些基團又可以與相連微球上蛋白反應，結果發生聚集。可以加一些阻斷劑BSA等解決：另外，也可提高微球交聯率。過一段時間后才出現凝集是因為微球偶聯蛋白后，相互之間由于攜帶同種電荷關系，比較穩定(所以能以膠體樣存在)，只有當偶爾相互碰撞，遇上彼此反應基團時才能結合。
8.乳膠微球自凝現象如何控制與避免？
乳膠微球自凝現象與許多因素有關，如高電解質濃度、表面價電荷被中合、或置于某些不利環境(血冷凍時)。
1)當電解質濃度升高到某一水平，使得表面負電荷被掩蔽，乳膠微球之間發生接觸便產生凝集，故高離子強度緩沖溶液不可使用，緩沖溶液濃度一般不要超過50mM。
2)對負電荷乳膠微球，不能使用正電荷得緩沖溶液(如Tris緩沖溶液)。
3)在長期貯藏時，懸浮介質pH應至少保持在比乳膠微球表面基團pKa值高1-2 pH單位。
4)高濃度乳膠微球容易促使膠體不穩定，故乳膠微球濃度以低濃度為宜，乳膠微球也不能受冷凍，否則會凝集。
5)偶聯時，將微球加入蛋白液中，而不是將蛋白加入微球中。
6)偶聯時，振蕩加快反應
總之，其原則是在微球與蛋白偶聯前，減少其在高離子強度下與其它微球接觸的機會。
9.為什么抗體偶聯至基微球后，即時檢測效果很好，但置于37℃2天后，抗體活性會下降？
1)乳膠微球含有表面活性劑，導致乳膠微球自身出現自凝現象，可以通過顯微鏡進行觀察。可偶聯之前進行清洗，避免偶聯乳膠微球聚集。
2)如果通過共價反應結合的抗體活性失活，常見原因是抗體質量差或試劑過期所致，可檢查試劑是否被污染，試劑中是否出現自由流動白色粉末、持續性團塊等來判斷。
10.乳膠微球偶聯抗體后與抗原進行反應，效果不明顯是什么原因所致？
1)抗原與抗體不匹配：
2)包被得抗體量下足：
3)抗體使用量雖多，但偶聯效率低。
11.如何儲存使乳膠微球穩定性高？
1)降低儲存溫度到2~8℃；
2)降低儲存液中的封閉劑濃度，防止抗體被替換：
3)確認儲存液中無能與抗體競爭的雜質，防止長時間取代抗體：
4)使用低濃度緩沖液儲存，如MOPSO、MES、HEPES等。
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